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腺相關(guān)病毒AAV具有表達(dá)滴度高、宿主免疫反應(yīng)輕微、感染譜廣、安全性高等優(yōu)勢(shì)，成為近年來(lái)在基因治療領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的病毒載體之一。西美杰代理的Cell Biolabs （AAV Helper Free Expression System）的AAV三質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)也是目前常用的一類AAV載體系統(tǒng)。
如下圖所示，該套AAV系統(tǒng)包含表達(dá)載體（Expression vector）、包裝質(zhì)粒（Rep-Cap plasmid）和輔助質(zhì)粒（pHelper plasmid）。其中表達(dá)載體是AAV病毒的核心，包含了ITR序列、CMV啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)等，用于攜帶外源基因；包裝質(zhì)粒負(fù)責(zé)表達(dá)AAV病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是復(fù)制缺陷型的，必須依賴輔助病毒（如腺病毒）才可以感染靶細(xì)胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質(zhì)粒上提供這些必要的輔助基因來(lái)確保重組AAV病毒具有感染性，消除AAV對(duì)輔助病毒的依賴，解決了AAV生產(chǎn)過(guò)程中要去除腺病毒污染的難題。
? Expression vector包含ITR序列，多克隆位點(diǎn)，攜帶目的基因；
? Rep-Cap plasmid包含Rep和Cap基因，決定了重組AAV的血清型和組織嗜性；
? pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2A和E4基因，使重組AAV具有感染性。
- AAV表達(dá)載體
AAV基因組為4.7kb，能夠攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8種AAV的表達(dá)載體，兼容常用的各種AAV包裝系統(tǒng)，表達(dá)載體都攜帶有2個(gè)ITR序列，使AAV基因組能正確形成T-形二級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)而保證了病毒的有效復(fù)制和包裝。載體上有氨芐抗性基因、多克隆位點(diǎn)，還可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇帶標(biāo)簽、無(wú)標(biāo)簽、不含啟動(dòng)子或自身互補(bǔ)型（self-complementary）AAV表達(dá)載體（產(chǎn)品詳情如下表）。
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貨號(hào) |
質(zhì)粒名稱 |
載體容量（kb） |
特征 |
|
VPK-415 |
pAAV-IRES-Puro |
1.8 |
Puro標(biāo)簽 |
|
VPK-416 |
pAAV-IRES-Neo |
1.6 |
Neo標(biāo)簽 |
|
VPK-417 |
pAAV-IRES-Hygro |
1.4 |
Hygro標(biāo)簽 |
|
VPK-418 |
pAAV-IRES-GFP |
1.7 |
GFP標(biāo)簽 |
|
VPK-419 |
pAAV-IRES-Bsd |
2 |
BSD標(biāo)簽 |
|
VPK-410 |
pAAV-MCS |
3 |
無(wú)標(biāo)簽 |
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VPK-411 |
pAAV-MCS Promoterless |
4 |
無(wú)啟動(dòng)子 |
|
VPK-430 |
pscAAV-MCS |
1.5 |
self-complementary |
- AAV包裝質(zhì)粒
AAV共有12個(gè)血清型，其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得，并且具有明確的的抗體反應(yīng)性，是目前常用的經(jīng)典AAV載體。盡管不同血清型AAV都具有正二十面體結(jié)構(gòu)，但其衣殼蛋白在序列與空間構(gòu)象上的多樣性，使得AAV與不同細(xì)胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面，AAV-2的感染譜較廣應(yīng)用較多，AAV-1在骨骼肌中的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較高，AAV-3易于轉(zhuǎn)導(dǎo)巨核細(xì)胞，AAV-5和AAV-6感染呼吸道上皮細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)較為顯著。因此，根據(jù)AAV不同血清型在組織感染性的相對(duì)特異性，可以用于在針對(duì)不同靶向組織的基因治療中尋求最佳的AAV載體類型與組合。除了常見(jiàn)的六個(gè)血清型AAV之外，Cell Biolabs還提供兩種重組型AAV包裝質(zhì)粒即AAV-DJ與AAV-DJ-8，如下圖所示，這兩種AAV的Rep-Cap基因是由多個(gè)野生型AAV的結(jié)構(gòu)基因重組而來(lái)，與其他野生型相比，AAV-DJ在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率更高，AAV-DJ-8則更適用于體內(nèi)感染實(shí)驗(yàn)。
以常用的AAV-2為參照，下表比較不同血清型AAV對(duì)種屬、組織細(xì)胞的感染率。值得一提的是，AAV-DJ對(duì)不同物種的肝細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞以及胚胎干細(xì)胞的感染能力都有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，甚至高于常用的AAV-2。
輔助質(zhì)粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質(zhì)粒，pHelper載體中包含了腺病毒的E2A、E4基因和VA RNA，由于我們常用的AAV包裝細(xì)胞系293和293T都含有E1基因，因此該系統(tǒng)中的pHelper質(zhì)粒上沒(méi)有再提供E1基因。
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VPK-401 |
VPK-402 |
VPK-403 |
VPK-404 |
VPK-405 |
VPK-406 |
VPK-400-DJ |
VPK-400-DJ-8 |
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細(xì)胞系 |
組織類型 |
AAV-1 |
AAV-2 |
AAV-3 |
AAV-4 |
AAV-5 |
AAV-6 |
AAV-DJ |
AAV-DJ/8 |
|
Huh-7 |
人肝臟 |
13 |
100 |
2.5 |
0.0 |
0.1 |
10 |
500 |
0.2 |
|
HEK293 |
人腎臟 |
25 |
100 |
2.5 |
0.1 |
0.1 |
5 |
500 |
0.3 |
|
HeLa |
人子宮 |
3 |
100 |
2.0 |
0.1 |
6.7 |
1 |
667 |
0.2 |
|
HepG2 |
人肝臟 |
3 |
100 |
16.7 |
0.3 |
1.7 |
5 |
1250 |
0.5 |
|
Hep1A |
小鼠肝臟 |
20 |
100 |
0.2 |
1.0 |
0.1 |
1 |
400 |
0.1 |
|
911 |
人視網(wǎng)膜 |
17 |
100 |
11 |
0.2 |
0.1 |
17 |
500 |
0.0 |
|
CHO |
倉(cāng)鼠卵巢 |
100 |
100 |
14 |
1.4 |
333 |
50 |
25000 |
5.0 |
|
COS |
非洲綠猴腎臟 |
33 |
100 |
33 |
3.3 |
5.0 |
14 |
500 |
0.3 |
|
MeWo |
人皮膚 |
10 |
100 |
20 |
0.3 |
6.7 |
10 |
2857 |
1.0 |
|
NIH3T3 |
小鼠成纖維 |
10 |
100 |
2.9 |
2.9 |
0.3 |
10 |
500 |
0.1 |
|
A549 |
人肺臟 |
14 |
100 |
20 |
ND |
0.5 |
10 |
1000 |
0.1 |
|
HT1180 |
人成纖維 |
20 |
100 |
10 |
0.1 |
0.3 |
33 |
333 |
0.2 |
|
Monocytes |
人原代單核細(xì)胞 |
1111 |
100 |
ND |
ND |
125 |
1429 |
100 |
ND |
|
Immature DC |
人樹(shù)突細(xì)胞 |
2500 |
100 |
ND |
ND |
222 |
2857 |
200 |
ND |
|
Mature DC |
人樹(shù)突細(xì)胞 |
2222 |
100 |
ND |
ND |
333 |
3333 |
100 |
ND |
ND = Not Determined
西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統(tǒng)外，還有腺病毒（Adenovirus），慢病毒（Lentivirus）和逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）載體系統(tǒng)，為廣大科研用戶提供了高效、便捷的病毒載體產(chǎn)品庫(kù)，小編之后還會(huì)一一為大家介紹這些病毒載體，敬請(qǐng)期待！
北京西美杰科技有限公司作為Cell Biolabs中國(guó)區(qū)代理，始終秉承著專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為廣大生物科技領(lǐng)域科研與企業(yè)客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與優(yōu)質(zhì)服務(wù)，如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎隨時(shí)撥打全國(guó)客服熱線400-050-4006或登錄西美杰官方網(wǎng)站www.flupple.com查詢訂購(gòu)！
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